Методи дослідження калу на хелікобактер пілорі

Бактерія Helicobacter pylori (хелікобактер пілорі) мешкає в клітинах слизової оболонки шлунка і дванадцятипалої кишки людини. Деякі штами (генетичні типи) мікроорганізму виділяють специфічні токсини, що руйнують клітини і підвищують ризик виникнення таких патологій, як хронічні гастрити і дуоденіти, виразкова хвороба шлунка та дванадцятипалої кишки, деякі види злоякісних опухолейа. Такі штами необхідно своєчасно виявляти і лікувати. Одним із способів визначення інфікування Helicobacter pylori є аналіз калу.

Механізм визначення бактерії за допомогою аналізу калу

ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція), культуральний і імунологічні аналізи калу відносяться до прямих методів дослідження. На відміну від непрямих методів, коли про наявність патологічного агента судять за присутністю продуктів його життєдіяльності або реакції імунної системи організму (вироблення антитіл), прямі методи виявляють безпосередньо сам мікроорганізм або його ДНК.
Всі види аналізу калу на хелікобактеріоз є неінвазивними (нетравматичними) видами дослідження на відміну від забору крові або гастродуоденоскопії.

молекулярна діагностика

Для проведення ПЛР використовують спеціальний прилад - ампліфікатор

ПЛР-метод є одним з видів молекулярно-генетичної діагностики і дозволяє визначити наявність Helicobacter pylori навіть в разі присутності в матеріалі невеликого фрагмента ДНК бактерії.

Суть методу полягає в багаторазовому збільшенні аналізованого зразка збудника захворювання. Для проведення реакції необхідний свого роду "каркас", Що складається з двох праймерів - отриманих за допомогою штучного синтезу фрагментів ДНК, ідентичних нуклеїнової кислоти Helicobacter pylori. Під час реакції між праймерами нарощується ланцюжок ДНК в разі присутності в калі фрагмента біоматеріалу мікроорганізму. У разі його відсутності реакції не відбувається.

Реакція проводиться при певних значеннях температури і кислотності середовища, складається з декількох десятків повторюваних циклів, для каталізу (прискорення реакції) застосовується спеціальний фермент - полімераза. За 30 циклів фрагмент ДНК патологічного агента, присутній в біоматеріалу, множиться в мільярд разів, що дозволяє з точністю діагностувати інфекцію.

При наявності відповідних праймерів можна виявити інфікування цитотоксичними (повреждающими клітини слизової шлунка) видами Helicobacter pylori.

культуральний аналіз

Культуральний аналіз (бактеріологічний посів) є мікробіологічними методом дослідження.

Біологічний матеріал поміщається в специфічне середовище, сприятливе для росту бактеріальної колонії. Після закінчення певного терміну (для Helicobacter pylori - більше тижня) культуру вивчають під мікроскопом, використовуючи для вірної ідентифікації колонії різні методи - забарвлення, здатність вступати в ті чи інші біохімічні реакції.

Крім виявлення патологічного антигену (збудника захворювання) метод дозволяє провести тест на його чутливість до антибактеріальних препаратів, що скорочує терміни і витрати на лікування, підвищує ефективність терапії.

На жаль, в деяких випадках результати тесту на чутливість in vitro ("в пробірці") Можуть не збігатися з результатами лікування in vivo (живого організму): у житті антибіотики, підібрані лабораторним методом, можуть бути не настільки ефективні.

Імунологічні методи аналізу

Імунологічні методи засновані на властивості антитіл злипатися з антигеном. Для дослідження антитіла зі спеціальними позначками з`єднуються з аналізованих зразком, в результаті, при наявності в матеріалі Helicobacter pylori, утворюються комплекси антиген-антитіло.

Відео: Діагностика хелікобактер пілорі helicobacter diagnostic

Показання до проведення обстеження

Всі види діагностики інфікування Helicobacter pylori мають свої переваги і недоліки. Доцільність застосування того чи іншого методу залежить від різних чинників і етапів лікування. Оптимальний спосіб дослідження вибирає лікар-гастроентеролог.

Показання до ПЛР-аналізу калу:

• виразки, ерозії шлунка і дванадцятипалої кишки;
• атрофія слизової оболонки шлунка;
• поліпи, пухлини шлунка;
• гастроезофагеальний рефлюкс (закид вмісту шлунку в стравохід), виразка стравоходу;
• генетична схильність: злоякісні пухлини шлунка у найближчих родичів (батьків, рідних братів і сестер);
• контроль ефективності антибіотикотерапії.

Дослідження ПЛР-методом оптимально призначати для оцінки доцільності проведення специфічного лікування антибактеріальними препаратами при наявних органічних ушкодженнях.

Показання до культуральному аналізу - визначення чутливості до лікарських препаратів при неефективності емпіричного лікування. Оскільки аналіз є складним (посів вимагає спеціальної середовища і відсутності доступу кисню) і довгостроковим, це дослідження не призначається для діагностики інфекції.

Бактеріологічний посів здатний виділяти тільки спіралеподібні форми Helicobacter pylori, але не кокові, які отримали останнім часом широку поширеність. Цей факт додатково знижує цінність дослідження.

Показання до імунологічних методів:

• симптоми функціональних і органічних патологій шлунка і кишечника:

• метеоризм, печія, відрижка;
• болю, мають періодичність протягом доби із загостреннями навесні і восени;
• проноси або запори;
• відчуття дискомфорту, переповнення шлунка;

Імунологічні методи і ПЛР без генотипування призначаються з метою скринінгу - зважаючи на простоту і відносно низькій вартості дослідження проводиться широким масам населення для виявлення групи ризику розвитку органічних і пухлинних уражень шлунка і кишечника.

На жаль, в Росії скринінг на Helicobacter pylori не отримав широкого розповсюдження.

Імунологічний аналіз проводиться до інструментальних методів дослідження при відповідній симптоматиці і дозволяє припустити інфікованість Helicobacter pylori. За результатами аналізу в разі потреби призначаються інші методи дослідження.

Переваги та недоліки ПЛР-аналізу калу

Специфічна терапія хелікобактеріоза антибактеріальними препаратами - процес тривалий, що супроводжується поганою переносимістю у багатьох хворих і високим ризиком розвитку ускладнень.

Призначення антибіотиків всім особам, інфікованим Helicobacter pylori, - порочна практика. Специфічна антибіотикотерапія показана лише пацієнтам з тенденцією до прогресування органічних уражень - ерозій, виразок, атрофічного процесу, - як правило, зараженим певними штамами бактерії. Цим хворим потрібно антибіотикотерапія з метою досягнення ремісії при виразковій хворобі і попередження ризику розвитку злоякісних новоутворень.

Виявити цитотоксичні типи Helicobacter pylori можна тільки за допомогою ПЛР-методу.

Переваги ПЛР-аналізу калу:

• висока чутливість методу;
• висока специфічність тесту;
• простота і неінвазивний забору матеріалу;
• безпеку;
• можливість виділення як спіралеподібних, так і кокова форм Helicobacter pylori;
• можливість виділення різних штамів бактерії.

Чутливість тесту - здатність до видачі істинно позитивних результатів. Чим вище чутливість, тим нижча частка хибнопозитивних результатів, коли антиген нібито виявляється у неінфікованих осіб.

Специфічність тесту - показник, що залежить від кількості помилково негативні (коли у інфікованого хворого антиген не виділяється) результатів дослідження. ПЛР-метод дослідження калу на Helicobacter pylori характеризується чутливістю 64-94% і стовідсоткової специфічністю.

Зібрати кал легко і просто. На відміну від забору крові або гастродуоденоскопії взяття матеріалу не вимагає застосування місцевих анестетиків, на які може розвинутися алергічна реакція, не завдає болю і дискомфорту, безпечно в плані зараження "брудним" інструментом. Дослідження не потребує докладання певних зусиль, як, наприклад, дихальний метод, що робить його доступним навіть для маленьких дітей.

Недоліки ПЛР-аналізу калу:

• відсутність можливості визначення чутливості до антибактеріальних препаратів;
• відсутність можливості розрізняти поточну інфекцію і успішного лікування, коли фрагменти ДНК бактерії можуть залишатися в фекаліях близько місяця;
• нижчий показник чутливості в порівнянні з дослідженням біоптату (зразка тканини або клітинної маси) слизової шлунка;
• відносно висока вартість аналізу з генотипуванням;
• строгі вимоги до персоналу: кваліфікація, неухильне дотримання правил, акуратність.

Один з основних недоліків ПЛР-методу є продовженням його основного гідності: висока чутливість тесту є причиною хибнопозитивних результатів в разі контамінації ("забруднення" ззовні) аналізованого матеріалу.

Відео: Діхателен тест за хелікобактер пілорі

Підготовка до здачі аналізу

Достовірність результату будь-якого аналізу залежить від чіткого виконання певних умов на всіх етапах, і забір матеріалу - не виняток.

Правила взяття матеріалу:

• за три доби до аналізу скасовуються антибіотики, проносні, що уповільнюють перистальтику препарати, ректальні свічки і деякі інші ліки за повчанням лікаря, тому слід попередити лікаря про застосування тих чи інших лікарських препаратів;
• збір калу здійснюється в видану лабораторією посуд, рекомендується відбирати проби з трьох різних точок;
• біоматеріал бажано доставити в лабораторію негайно-в разі відсутності такої можливості пробу слід зберігати при температурі 2-8 градусів не довше 24 годин;
• якщо аналіз виконується для оцінки ефективності призначеної раніше антибіотикотерапії проти Helicobacter pylori, кал збирається не раніше, ніж через чотири тижні після закінчення лікування.

Уповільнення пасажу калових мас, запори можуть призводити до руйнування бактерії в фекаліях, що є причиною хибно-негативних результатів. Для підвищення достовірності результату лікар може призначити перед аналізом легке проносне - лактулозу.

Як і де здати аналіз

Аналізи призначає гастроентеролог, тому перед дослідженням на Helicobacter pylori необхідна його консультація.

Орієнтовна вартість дослідження калу:

• ПЛР-метод з генотипуванням - 1200 рублів;
• ПЛР без генотипування - 600 рублів;
• чутливість до антибіотиків - 600 рублів;
• імунологічні методи - 400-650 рублів (в залежності від методу).

Для найбільш точної діагностики Helicobacter pylori необхідно вибирати медичний заклад, що заслужило хорошу репутацію.

Результати дослідження

Період обробки аналізів, їх достовірність залежать від методу визначення антигену.

Терміни виконання, достовірність і інтерпретація результатів аналізів калу на хелікобактеріоз.

Низька достовірність імунологічного і культурального аналізу пояснюється малимсодержаніем антигену у фекаліях: якщо ПЛР-аналіз чутливий і при наявності 10 клітин, то для достовірного результату інших методів клітин має бути хоча б в 10 разів більше.

Дослідження калу на хелібактеріоз безпечно, нетравматичними і може здійснюватися різними методами, що дозволяють виявити інфекцію, визначити штами вірусу і чутливість патогена до антибіотиків.

За результатами аналізів можна сформувати групу ризику, у представників якої висока ймовірність розвитку виразки шлунка і дванадцятипалої кишки, злоякісних пухлин шлунка-оцінити ступінь ризику і мінімізувати його своєчасним антибактеріальним лікуванням цитотоксичних штамів хелікобактеріоза.

Статті за темою "Методи дослідження калу на хелікобактер пілорі"

Як називається аналіз крові на вагітність

Як дізнатися, чи не заражені ви h.pylori

Що таке антральний гастрит

Як запобігти інфікуванню h. Pylori